色譜柱在液相色譜和液相色譜串聯質譜聯用技術中扮演了關鍵的角色,作為核心組件之一,其作用是對樣品進行分離和分析。液相色譜柱通常由不銹鋼制成,內部填充了各種不同的吸附劑或固定相,如C18、C8或C6等不同種類的鍵合相。這些鍵合相與流動相(即樣品溶液)中的化合物發生相互作用,使得不同的化合物在色譜柱上得以分離。
在我們日常分析檢測過程中,經常會遇到各種色譜峰型的問題,如峰拖尾、峰變形、峰分裂、峰前沿等等,均可能會影響到分析結果的準確性和可靠性。其中,峰拖尾便是我們檢測結果中比較常見的現象之一,明確色譜峰拖尾產生的原因并采取有效措施進行色譜峰型優化可以幫我們獲得更加準確可靠的檢測結果。
什么是峰拖尾?
色譜峰拖尾是一個現象,指在色譜分析過程中,某些色譜峰的形狀呈現出后沿不平滑,不均勻,甚至出現“尾巴”的現象。這會導致色譜峰的對稱性降低,影響到色譜峰的峰高、峰面積等參數的測量精度,從而影響到樣品的分析結果。
如何評價色譜峰的拖尾
大多數情況下制藥行業用美國藥典(USP)中拖尾因子(Tf)來評價,而其余的分析行業內則會選擇用對稱因子(As)來評價。
其中,拖尾因子Tf=(a+b)/2a,a和b分別為5%峰高處的左右半峰寬。
對稱因子As=d/c,其中c和d分別為10%峰高處的左右半峰寬 。如果a=b,c=d,那么拖尾因子和對稱因子的數值都等于1,也就是該峰不拖尾。實際工作中,當拖尾因子和對稱因子小于2時,這兩個值是非常接近的,如下圖所示。
色譜峰拖尾產生原因
色譜峰拖尾是一個常見的問題,通常是由于樣品在色譜柱上的保留不足或是不均勻所導致的。下面是一些可能導致色譜峰拖尾的常見原因:
(1)化學效應:有時樣品中的化學物質之間會發生反應,導致色譜峰拖尾。例如,有些物質可能與色譜柱上的硅羥基發生反應,形成氫鍵,導致保留時間延長,從而出現拖尾。
(2)柱外效應:如果色譜柱外的樣品或流動相在進入色譜柱時形成氣泡或脈沖,可能會導致色譜峰拖尾。此外,如果色譜柱安裝不當,例如連接螺母不匹配或柱床體積過小,也可能會影響色譜柱的性能,導致色譜峰拖尾。
(3)流動相不合適:流動相的極性和組成可能會影響樣品的保留和分離效果,如果流動相的極性過強或過弱,或者流動相中含有雜質,可能會導致色譜峰拖尾。
(4)色譜柱不匹配:如果使用的色譜柱類型和規格與樣品不匹配,也可能會導致色譜峰拖尾。例如,如果色譜柱規格過小,會導致樣品在色譜柱上的保留不均勻,從而引起色譜峰拖尾。
(5)溫度不合適:溫度的變化可能會影響樣品的保留和分離效果,如果溫度過高或過低,可能會導致色譜峰拖尾。
峰拖尾對分析結果的影響 色譜峰拖尾會影響峰高和峰面積的測量精度,主要是因為拖尾峰會導致色譜峰的對稱性降低,使得峰高和峰面積的計算不準確。在計算峰高時,拖尾峰的負面影響會更加明顯。因為拖尾峰的后沿不平滑,不均勻,使得峰高的計算不準確,進而影響到最低檢出限的計算。而在計算峰面積時,拖尾峰也會影響峰面積的測量精度。因為在積分色譜峰時,峰的起點和終點通常是根據色譜峰的斜率來確定。如果色譜峰越拖尾,它的尾部基線越平緩,終點就越難確認。特別是在基線波動較大時,這一點體現的更加突出,那么它就會影響積分得到的峰面積。因此,在色譜分析中,如果色譜峰出現拖尾現象,應該采取相應的措施來改善色譜峰的形狀,以提高峰高和峰面積的測量精度。 色譜峰拖尾解決方法
為了解決色譜峰拖尾的問題,可以采取一些措施。例如,可以優化色譜條件,如改變流動相的組成和極性、降低樣品的濃度、改變柱溫等;可以更換新的色譜柱或對色譜柱進行清洗和再生;也可以調整儀器參數,如改變檢測參數、增加進樣量等。此外,如果是因為樣品中存在雜質或氣泡等問題引起的色譜峰拖尾,也可以采取相應的措施進行解決。
上海??瞪锟萍加邢薰旧a的色譜柱兼容HPLC和UPLC的分析需求,助力用戶老師在臨床項目檢測過程中獲得更好的峰型和更高的分離度。色譜柱類型可覆蓋常見的臨床質譜檢測項目,包括維生素、氨基酸、類固醇激素、甲狀腺素和藥物濃度等,每種色譜柱對應的檢測項目均已有成熟的儀器方法供用戶選擇,用戶無需二次方法開發。上海??瞪镏荚跒榕R床客戶提供更加全面和專業的臨床質譜服務方案!
參考文獻
[1]Szymon,B.&B.Boguslaw, Residual silanols at reversed-phase silica in HPLC - A contribution for a better understanding[J].Chromatography A,2012,(35):1191-1200.
[2]王娜,王海嬌,岳明新,趙恩好,劉琦.高效液相色譜常見問題分析及對策[N].遼寧化工,2008,4
[3]宋學英,鄭美青,趙淑銳.高效液相色譜實驗教學中常見問題的分析與研究[J].醫學教育管理,2021,Vol,Supp.